编者按：目前，关于PGT-M的共识还很少，为了规范PGT-M的应用，中国医师协会生殖医学专业委员会精准辅助生殖研究学组及中国医师协会医学遗传医师分会部分专家，包括生殖医学、遗传学和心血管医学专家，共同制定了这一共识。共识包括PGT-M的适应证、禁忌证、诊断策略、遗传和生殖咨询、报告形式、结果解释、知情同意和患者随访等。这一共识将使更多相关的临床工作者和研究人员获益，供临床及实验室参考使用。
（2）致病基因致病变异位点检测技术：
①目标变异位点测序：即包含致病变异位点和/或遗传多态位点附近区域扩增后Sanger测序［38-39］。主要用于点突变、小片段插入/缺失突变、遗传多态位点的检测。
②片段分析：针对特定DNA靶点设计引物，每个靶点扩增得到的大小不等的DNA片段；引物末端标记荧光，PCR后产生带不同荧光标记的DNA片段；产物进行毛细管电泳，利用荧光检测器对DNA片段进行识别和区分，从而提供片段大小、相对定量和基因分型等信息［32,40］。
③限制性内切酶片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）分析：限制性内切酶能识别特定的DNA序列，当致病变异生成新的或破坏了原有的限制性酶切位点时，酶切消化后会产生不同长度的片段，以此进行分析［41］。该技术局限性在于限制性内切酶识别位点有限，而且酶切消化不完全或失败导致误诊的可能［42］。
④实时荧光定量PCR（quantitativereal-timePCR，qPCR）：变异位点（或多个位点）和遗传信息标记位点同时扩增，探针设计灵活。目前已有许多成熟的适用于PGT-M基因分型的qPCR平台和检测试剂盒［43］。
⑤双突变扩增阻滞系统检测（dualamplificationrefractorymutationsystem，D-ARMS）结合qPCR：D-ARMS-qPCR方法主要用于变异类型为点突变、小片段插入/缺失突变的胚胎检测。该方法可对已知突变进行检测，但对引物特异性的依赖较高，可用该方法检测的疾病较少［44］。
（3）致病基因的变异位点连锁分析：当胚胎样本较少或致病变异位点检测困难无法实现变异位点的直接检测时，连锁分析就更为重要。针对倒位、大片段缺失/重复等难以直接检测的变异类型，采用基因上下游和基因内部的遗传多态位点（STR或SNP）连锁分析进行间接诊断［45］。
3.PGT-M的检测策略：单细胞或少量细胞经WGA后进行目标变异位点检测结合家系连锁分析是目前PGT-M的主要检测策略［46］。
（1）基于WGA的SNP微阵列芯片检测策略：该策略既可以检测全基因组CNV，还可以基于SNP连锁分析进行单体型分型，但不能直接对突变位点进行检测，需要有先证者或相关家系成员样本。该技术已成为国内外PGT-M的常用检测技术［47-49］。
（2）基于WGA的高通量测序检测策略：基于WGA的高通量测序技术越来越多地应用于临床PGT-M［50-53］。通过测序可同时得到胚胎染色体非整倍性信息和致病变异位点信息，同时利用致病基因周围的SNP位点进行连锁分析，实现一步测序完成胚胎的染色体筛查和致病变异位点检测及连锁分析。
（3）通过高通量测序使用单体型挑选HLA配型一致的胚胎，要求同时具有夫妻双方及患儿的DNA样本。使用单体型HLA配型需要关注的HLA相关基因包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DR和HLA-DQ。在具体单体型分析中，要求包括上述5个基因所在区域的上下游各不少于3个可用的杂合SNP位点。在包括上述5个基因的HLA区域内，要求具有不少于6个可用的杂合SNP位点。在对胚胎进行HLA配型的同时，需同时考虑检测导致患儿疾病的突变位点，排除突变位点的遗传。同时排除染色体数量异常。在得到胚胎单体型后，对于仅有母源或父源一方匹配的半合胚胎，夫妻双方需充分知情后决定是否移植。
文章来源：中华生殖与避孕杂志公众号
作者：中国医师协会生殖医学专业委员会，中国医师协会医学遗传医师分会
责任编辑：暖暖
