单纯的做阴道镜检查并不疼，与普通的妇科检查没有区别，只是将阴道通过阴道扩张器放大，扩张后将宫颈局部暴露，可以仔细的观察宫颈、外阴以及阴道黏膜皮肤的异常疾病，并且可以通过醋酸白试验、碘试验等查找可疑的部位，但是可能会有坠胀感，但不是明显的疼痛，所以女性不用太担心。
如果有可疑的病变部位，需要取活检，取活检会有疼的感觉，尤其是取外阴的活组织检查。由于外阴的感觉神经的末梢很丰富，所以外阴活检会有疼痛感，一般会给予局部麻醉药物，如利多卡因等，便可以很好地解决疼痛的问题。
做阴道镜检查还可以做醋酸白试验和碘试验，醋酸白试验是用3%醋酸棉球浸湿宫颈，看看宫颈是否变色。碘试验是用复方碘溶液棉球浸湿宫颈，看看是否着色。正常醋酸白试验上皮不变色，碘试验阳性，也就是着色，呈棕褐色。
阴道镜本身没有直接接触身体，是通过阴道窥阴器暴露宫颈，来检查的，由于宫颈对疼痛不敏感，浸湿醋酸和复方碘溶液棉球也没有感觉，所以做阴道镜检查不疼的。
此外，患者需注意做阴道镜必须等到月经结束之后，一般适合在月经干净后两周内进行。检查前的24个小时以内不要在阴道上用药或者是冲洗，不作内诊及宫颈刮片，以免影响检查结果。
