编者按：体外激活技术是指IVA原始卵泡，使其生长至可接受激素刺激的阶段，结合促排卵获得成熟卵泡的技术，最终通过体外受精-胚胎移植技术达到受孕目的。常用方法为激活PI3K/Akt信号通路和阻断Hippo信号通路。随着研究深入，新的激活方法逐渐发展。现已有多例早发性卵巢功能不全患者应用IVA技术成功妊娠的案例报道，结合生育力保存技术，卵巢低反应以及女性恶性肿瘤患者都可能受益于IVA技术。然而IVA技术尚不完善，仍在临床成功率、安全性等方面存在问题，需要在机制和临床应用继续探索。本文针对IVA技术的机制、临床应用情况以及发展方向方面进行论述，为IVA的研究和临床应用提供参考。本文分为多个部分，点击系列文章列表阅读全文。
（4）肝激酶b1（liverkinaseb1，LKB1）/AMPK信号通路：LKB1是一种抑癌基因，其编码一种丝氨酸/苏氨酸激酶，即LKB1，又名serine/threoinkinese11，STK11，该激酶可直接磷酸化并激活AMPK，而AMPK是所有真核生物调节糖类和脂质代谢的重要枢纽［32］，LKB1/AMPK是维持原始卵泡池的重要信号通路。有研究显示，特异敲除小鼠原始卵泡中卵母细胞中的Lkb1，原始卵泡被提前激活，发育异常而死亡，导致卵泡池耗竭，推测该信号通路重要的下游信号通路可能是mTOR信号通路［33］。还有研究显示，不论使用AMPK抑制剂体外短时间处理新生小鼠卵巢并移植至成年受体鼠体内，还是体内注射，均可产生更多成熟卵泡，甚至体内注射后联合IVF-ET可获得健康子代［34］。
（5）c-Jun氨基末端激酶信号通路：c-Jun氨基末端激酶信号通路是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase，MAPK）通路的一重要分支，它在细胞增殖、存活和凋亡过程中起重要作用［35］。一项使用青春期前绵羊皮质的研究指出，使用两种不同的c-Jun磷酸化抑制剂可抑制原始卵泡的活化［36］。还有研究表明，抑制JNK信号通路可抑制肌细胞FOXO3a的核输出［37］，在原始卵泡中，过多FOXO3滞留在细胞核中将会抑制原始卵泡活化［13］。
（6）p27kip1-CDK系统：p27kip1又名细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1b（cyclin-dependentkinaseinhibitor1b，Cdki1b），既是一种重要的肿瘤抑制蛋白与细胞周期抑制因子，可负性调节细胞周期［38］。p27特异性地在原始卵泡的前颗粒细胞和卵泡细胞，生长卵泡的颗粒细胞中表达。研究表明，原始卵泡中的p27通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶2的A/E复合体（cyclindependentkinase2-cyclinA/E，CDK2-cyclinA/E）活性来抑制原始卵泡激活，特异性敲除卵母细胞中的p27会导致原始卵泡过早激活，成年早期卵泡就被耗竭，从而造成卵巢早衰［39］。值得注意的是，p27kip1系统与PTEN/PI3K/Akt/FOXO3信号通路在调控原始卵泡激活时相互独立［3］，p27和FOXO3敲除小鼠均会导致原始卵泡过早激活，但表型不同，双敲小鼠会出现计量累加效应［13］。
2.前颗粒细胞的激活与分化——mTORC1-KITL信号通路：研究显示，原始卵泡激活时原始卵泡颗粒细胞（primordialfolliclegranulosacells，pfGCs）激活早于卵母细胞［40］。在敲除pfGCs中Tsc1基因的小鼠卵巢中［41］，pfGCs的mTORC1信号增强，KITL表达增加，前颗粒细胞过早激活以及协同卵母细胞过早激活，表明pfGC可能通过mTORC1信号通路增强了KITL的表达，使KITL与卵母细胞表面的KIT受体结合，从而促使原始卵泡活化。此外，敲除pfGCs中mTORC1信号通路的关键组分mTOR相关调控蛋白（regulatoryassociatedproteinofmTOR，Rptor）后，原始卵泡无法激活［42］，表明前颗粒细胞对整个原始卵泡活化的关键上游调控作用。目前研究表明，前颗粒细胞分泌的KITL与卵母细胞表面的KIT受体结合之后会机会卵母细胞内的PI3K/Akt通路，从而激活整个原始卵泡［14］。总之，前颗粒细胞在调控原始卵泡活化过程中似乎发挥着决定作用。
3.卵巢内环境及原始卵泡周围微环境——激活抑制因子：在卵泡发生调控因子中，AMH，SDF1起着抑制原始卵泡活化的作用，也是近年来的研究热点。
（1）AMH：AMH是转化因子-β（transforminggrowthfactor-beta，TGF-β）超家族的成员之一，由生长中的窦前卵泡和小窦卵分泌，被认为可以抑制原始卵泡的活化和窦前卵泡的成熟［43-44］。一项使用大鼠卵巢的研究表明，AMH能够维持原始卵泡的静止状态，也能抑制已知的卵泡活化因子（bFGF、KITL、KGF）诱导的活化［45］。一项使用绵羊卵巢皮质的研究表明AMH对原始卵泡活化的抑制呈剂量依赖性［36］。但AMH的抑制剂量却无一致结论［44，46］。
本文刊登于《中华生殖与避孕杂志》
2021,41(11):1045-1051.
作者：
张雅梦王建业周平曹云霞
