验孕棒的原理是通过检测尿液中的绒毛膜促性腺激素水平来判断是否怀孕；验孕棒的工作原理基于抗原与抗体的特异性结合反应；通常在月经推迟一周左右即可使用验孕棒进行检测。
验孕棒的工作机制依赖于人体内的绒毛膜促性腺激素，这种激素在女性怀孕后由胎盘产生，并逐渐释放到血液中，随后可通过肾脏进入尿液。未怀孕的女性尿液中几乎没有这种激素，一旦怀孕，激素水平会显著上升。验孕棒内置有能识别这种激素的抗体，当尿液样本流过验孕棒的测试区时，如果尿液中含有绒毛膜促性腺激素，就会与验孕棒中的抗体结合，从而触发内置的化学反应，导致测试线出现，显示怀孕的结果。这种抗原与抗体的结合反应具有很高的特异性，因此验孕棒的准确性相对较高。使用验孕棒时，需注意把握最佳检测时间，通常建议在预计月经来潮日期推迟一周左右进行，此时的激素水平足以被验孕棒检测到，而太早检测可能会因为激素水平不够导致假阴性结果。
使用验孕棒时应确保按照说明书操作，避免污染试纸，影响结果；测试前应避免大量饮水，以免稀释尿液，导致激素水平降低；最好使用早晨的第一次尿液进行检测，因为此时的激素浓度最高；查看结果时应注意，即使验孕棒显示阳性，也需要去医院进行进一步的检查确认，因为验孕棒也存在一定的假阳性率；同时，如果结果显示阴性但仍有怀孕的可能，建议隔天再次测试或咨询医生。
